Breednet: secondo report del CREA

L’attività  del CREA, in questa seconda parte del progetto, è stata di tipo eminentemente scientifico. In prima battuta ci si è dedicati alla caratterizzazione morfologica dei semi e germinazione in vitro.

I semi di Rosa (Azienda Agricola NIRP), di Garofano e Alstroemeria (Azienda Agricola Sapia) sono stati fotografati, contati e misurati (lunghezza, larghezza, perimetro ed area – con software dedicato) e sono state condotte prove di vitalit  (test di tetarzolio). Al fine di scarificare e/o sterilizzare i semi, sono stati presi in considerazione differenti agenti chimici (HNO3, H2O2, NaOCl) a varie concentrazioni, a confronto con un controllo (H2O).

Le prove di germinazione hanno previsto l’utilizzo di vari substrati di crescita (MS,   MS, carta bibula imbibita con H2O sterile e distillata, H2O e agar, sabbia sterile imbibita con H2O sterile e distillata) e i semi sono stati posti a differenti livelli termici e di luce, tipici per le specie in esame

Si è poi passati alla androgenesi e ginogenesi coltivando antere e ovuli per la produzione di linee aploidi.

Durante i primi mesi di attività del progetto sono state effettuate prove per ottenere piante aploidi o doppio aploidi da: 1) 54 individui di anemoni di-aploidi (da cultivar di anemoni tetraploidi – Azienda Agricola Biancheri), 2) 25 varietà di ranuncolo (Azienda Agricola Biancheri) e 3) 4 varietà di ortensia (Azienda Agricola Mansuino). Le piante di anemone e ranuncolo, ottenute da colture di antere dopo shock termico e coltivazione al buio e temperatura controllata, sono state trasferite in vitro su substrato fresco per le successive fasi di moltiplicazione. Le antere di ortensia campionate in estate sono controllate per verificare la formazione di plantule androgeniche.

Si è poi passati all'analisi della vitalità e conservazione del polline.

Sono state svolte prove di vitalità e di conservazione di polline di ranuncolo (in collaborazione con l’Azienda Agricola Biancheri) e di ortensia (in collaborazione con l’Azienda Agricola Mansuino) raccolti e sottoposti a diverse modalità di conservazione (temperatura ambiente, 4 C, -20 C, -80 C). La vitalità è stata successivamente valutata mediante test di germinabilità su terreno agarizzato, e mediante colorazione con il fluoforo vitale Fluorescina diacetato (FDA).

Quindi si è arrivati alla fase principale: la Poliploidizzazione.

La supervisione dell’attività è stata svolta dal Dott. Andrea Chiappori durante il tirocinio “Nuova Garanzia Giovani” riguardante la messa in vitro di 3 varietà di elicriso ricevute dall’Azienda Agricola Flavio Sapia. Quest’attività ha riguardato la raccolta di bibliografia, l’utilizzo di 2 protocolli di sterilizzazione su espianti (apice e meristema laterale) da talee in vivo, la preparazione di terreni di coltura solidi per la messa in vitro e la successiva propagazione delle 3 varietà, i rilievi periodici sulla contaminazione.

Il materiale ottenuto è attualmente mantenuto in condizioni sterili per i prossimi esperimenti di poliplodizzazione.

Per chiudere questo secondo report, viene data indicazione della rassegna dello stato dell’arte sulle specie del progetto. Durante i primi mesi del progetto   stata raccolta la bibliografia scientifica più aggiornata relativa a:

- sequenziamento di genoma e trascrittoma,

- marcatori molecolari,

- trasformazione genetica,

- genome editing per la rosa e per la famiglia delle Ranuncolaceae.